紫外吸收法测定蛋白质含量

（一）目的

学会用紫外吸收法测定蛋白质含量的方法。

（二）仪器

751型分光光度计

（三）原理

大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，warburg——等测定了酵母烯醇酶和酵母核酸在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。

该方法是以酵母烯酶蛋白和酵母核酸为标准建立计算公式，而不同蛋白质的氨基酸组成也不同，因而光吸收也不尽相同，这就会带来误差。

（四）方法步骤

1．取待测样品溶液置于光径1cm的石英比色杯中，于751型分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A₂₈₀和A₂₆₀，用蒸馏水（缓冲溶液或盐溶液，视样品溶液而定）为比色空白对照。

2．根据下列公式计算样品中的蛋白质含量。

蛋白质含量（mg/ml）=1.55A₂₈₀—0.76A₂₆₀

（五）实验报告

计算所测材料蛋白质的含量。

（六）思考题

1、这里介绍了几种测定蛋白质含量的方法，它们所根据的原理是什么？

2、试比较测定蛋白质含量的几种方法的优缺点。