实验8 植物硝态氮的比色测定

一、目的

学会植物组织中硝态氮含量的测定方法，了解植物组织中硝态氮的含量。

二、材料用具及仪器药品

花生植株、分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠

20%醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。

混合粉剂配法：硫酸钡100g、a一萘胺2g、锌粉2g、对氨基苯磺酸4g、硫酸锰10g、柠檬酸75g。

上述各试剂分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各试剂混合成无颗粒状灰白色的均匀体，粉剂宜在黑暗干燥条件中保贮，七天后方可使用。

三、原理

硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下：

四、方法步骤

1.标准曲线绘测：

取恒重亚硝酸钠（NaNO₂）0.6071g溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml。并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm）。取上清液在520nm波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。

2.组织液的提取

称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算：

植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v）

式中C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g植物组织所制备的提取液的总体积（ml），如本法为40ml。

五、实验报告

计算植物组织中硝态氮的含量。

六、思考题

硝酸盐还原成亚硝酸盐的过程需要哪一种酶催化？