实验24  蛙的早期发育观察

一、实验目的

1．了解生殖的基础理论，学习蛙的人工催产和受精技术。

2．通过对蛙早期发育的观察，认识动物个体发育的一般过程，从而加深对动物系统演化的理解。

3．学会自己查阅文献、设计实验、分析处理实验数据及实验结果的报告。

二、实验材料

1．性成熟的牛蛙、虎纹蛙等人工养殖的蛙类。或在繁殖时期，同学自己在野外采集性成熟的蛙类，如泽蛙等。

2．或性成熟的鱼类。

三、实验器具与药品

1．实验器具

由同学根据实验设计自行准备。

2．药品

丙酮、无水酒精、蛙类脑下垂体（PG）、绒毛膜促性腺激素（HCG）、促黄体生成素释放激素类似物（LRH-A）、生理盐水、蒸馏水等。

四、实验操作

实验前同学查阅文献资料，做出实验方案设计，完成实验内容。

1．人工催产

（1）不同催产剂组合催产效果的比较。

（2）不同条件催产效果的比较。

2．受精卵的获得

（1）精子悬浮液的制备

杀死或麻醉一只雄性亲蛙，解剖取出精巢，将精巢轻轻地在吸水纸上滚动，除去粘附其上的血液及肠系膜等。将干净的精巢放入小烧杯或培养皿中，捣碎。加入10 mL左右的生理盐水，制成精子悬浮。将乳状悬浮液静置15分钟，激活精子。

（2）采卵

抓住待产雌蛙，使其背部对着手心，手指部分圈住蛙体，并刚好在前肢的后面，手指尖搁在蛙的腹部；另一手抓住并伸展蛙的两后肢（图24-1）。

握蛙手指自蛙体前部开始轻微加压，然后向泄殖腔方向逐渐捏握，卵即可由泄殖孔流出。由于开始时通常会流出泄殖腔液，因此丢弃最初排出的卵粒，擦干泄殖孔周围后，再收集卵于培养皿中。

（3）受精

向盛卵培养皿中加入已制备好的精子悬浮液，摇匀，使精子与卵子充分接触。10-15分钟后倒出精子悬浮液并加入清水，完成受精，得到受精卵。

将受精卵移入盛有清水的培养皿中，并供给充足氧气，观察发育过程。

也可将催产后的雌、雄蛙一起放入水簇箱中，让它们自行抱对产卵。但此方法需密切注意观察抱对行为，以便及时采得受精卵。否则难以准确把握受精时间。

3．早期发育的观察

（1）观察记录早期发育过程。

（2）了解影响早期发育的条件因素，并加以分析。

五、作业与思考题

1．试述蛙的催产及人工受精操作要点。

2．不同催产剂组合催产效果的比较分析。

3．绘出蛙类早期发育图。

4．记述蛙类发育时期。

附录

（一）蛙脑下垂体的获取与处理

用大剪刀从口角处横向剪断头颅，再用小剪刀从枕骨大孔的两侧插入颅腔，剪开颅骨，将颅底打开，在脑的腹面可见一粉红色颗粒状小体，即为脑下垂体。用尖镊子轻轻将脑下垂体取出，去除周围组织，然后放入盛有丙酮或无水酒精的小广口瓶中脱脂脱水12小时，取出晾干，在阴凉或低温处密封干燥保存备用。经脱脂脱水处理后，亦可更新丙酮或无水酒精中，长期保存备用。

若无备用的脑下垂体，催产时可临时取新鲜的使用。

（二）黑斑蛙正常发育时期表（20±0.1℃）

发育时期

发育阶段

由受精起所需的时间（小时）

1

受精卵

0

2

2-细胞

2.0
± 0.02

3

4-细胞

2.7
± 0.09

4

8-细胞

3.3
± 0.08

5

16-细胞

4.0
± 0.4

6

32-细胞

4.6
± 0.3

7

囊胚早期

5.4 ± 0.2

8

囊胚中期

8.4

9

囊胚晚期

12.4

10

原肠胚早期

15.9 ± 0.3

11

原肠胚中期

19.9 ± 0.4

12

原肠胚晚期，卵黄栓

21.7 ± 0.0

13

神经板期

32.4 ± 1.3

14

神经褶期

39.1 ± 1.3

15

胚胎的转动

41.9 ± 1.1

16

神经管期

45.3 ± 0.82

17

尾芽期

49.9 ± 1.9

18

肌肉感应

60.2 ± 1.2

19

孵化

70.4 ± 3.0

20

心跳

79.8 ± 4.7

21

鳃血循环

97.2 ± 6.9

22

开口期

129.9 ± 2.7

23

尾血循环

153.9 ± 4.9

24

鳃盖期

160.4 ± 3.7

25

鳃盖右端合缝

195.5 ± 2.3

26

鳃盖封闭

202.3 ± 5.9

（三）豹蛙胚胎发育（图24-2）

图24-2  豹蛙（Rana pipiens）的胚胎发育（自Leland）